肝脏缺血再灌注（Hepatic Ischemia Reperfusion Injury, HIRI）模型

在传统的肝脏肿瘤切除、肝内胆管结石、肝破裂手术中，为防止大量出血及影响术中视野，需要暂时性选择性阻断入肝血流，一定条件下恢复肝组织血氧供应后，肝组织功能代谢障碍及结构破坏进一步加剧的过程，即为肝缺血再灌注损伤。

产品描述

1 实验动物

SPF级BALB/c小鼠，雄性，周龄：6-8周，体重：20g-25g

2 实验周期

1-3个工作日

3 建模方法

⑴实验材料

眼科剪1个（直/尖头/10.5cm）、眼科镊1个（直/1mm宽/10cm）、眼科镊1个（弯/1mm宽/10cm）、有齿镊1个（1.88mm宽/12cm）、持针钳1个（1.55mm宽/12cm）、动脉夹1个（4cm）、撑开器1个（15mm/4cm）、7-0可吸收缝合线（金环）、酒精棉球、无菌棉签、无菌纱布、剃毛器、小鼠手术操作台

⑵小鼠麻醉方法及术前准备

2％三溴乙醇（赛默飞），25 ml/kg腹腔注射麻醉小鼠剃毛备皮碘伏消毒酒精脱碘，小鼠术前12h禁食，自由饮水。

（3）实验方法

①腹腔皮肤横向切口1cm，腹膜横向切口1cm，小心剥离打开腹腔。

②小心分离出肝脏左、中叶找到门静脉和肝动脉，微动脉夹夹闭门静脉和肝动脉，使约70%的肝脏缺血，肉眼可见阻断叶颜色变浅，说明阻断成功，用止血钳夹闭皮肤切口临时关闭腹腔，同时将小鼠放在37℃恒温加热垫上保温。

③肝左中叶颜色由红色逐渐转为苍白或土灰色，而肝右肝叶颜色无明显变化，说明肝血流阻断成功。

④完成持续缺血60min后，重新打开腹腔，迅速取出血管夹，恢复缺血肝血流，0.5min左右可见缺血区肝脏由浅色逐渐恢复为鲜红色表明再灌注成功，逐层缝合腹腔肌肉和皮肤关闭腹腔，完成手术。

4 注意事项

⑴分离肝蒂时要非常小心，腹膜钝性分离；

⑵术前禁食12 h；

⑶夹闭时要一次完成；

⑷缺血期应注意保持腹腔充分水化，用湿纱布覆盖暴露部位。

5 模型评价

（1）肝脏缺血损伤评分：

0分：无肝细胞损伤；

1分：轻度损伤，特点为细胞质空泡化，病灶核固缩；

2分：中度损伤，血窦膨胀，细胞溶质空泡化，细胞边界模糊；

3分：中度到重度损伤，凝固性坏死，大量血窦膨胀，红细胞渗出到肝锁，嗜伊红细胞增多，中性白细胞着边（附着于血管壁）；

4分：严重坏死，失去肝脏结构，肝索崩解，出血，嗜中性粒细胞渗入。

（2） 细胞因子的检测

肝脏损伤后，血清中TNFα、IFNγ、IL-2、IL-6、ICAM1等细胞因子的表达显著升高，可以用ELISA法检测。

（3） 肝脏组织形态学检测

统一取肝左叶组织1.5cm×1cm×0.2cm于4%多聚甲醛溶液中固定24H后脱水包埋，石蜡切片后进行HE染色。

HE染色：

1-3d 凝固性坏死, 大量血窦膨胀, 红细胞渗出到肝锁, 嗜伊红细胞增多，严重坏死, 失去肝脏结构, 肝索崩解, 出血, 嗜中性粒细胞渗入；

7-14d 细胞质空泡化,病灶核固缩，窦扭曲不规则，肝细胞不同程度水肿及气球样变，可波及整个肝小叶；

21-28d 逐渐趋向自愈，肝索排列轻度紊乱。

（4）血清学检测

    鼠HIRI缺血60min再灌注1-28D ALT、SOD、TNF-a、MDA血清指标含量变化。

6 模型应用

HIRI模型适用于肝损伤的研究。

7 补充说明  

本实验是以BALB/c小鼠为基础制备的模型，若需要其他动物模型需要跟我司联系确定详细报价。