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脑中动脉阻塞(Middle Cerebral Artery Occlusion,MCAO)模型
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脑中动脉阻塞(Middle Cerebral Artery Occlusion,MCAO)模型

脑中动脉阻塞(MCAO)模型是研究脑缺血损伤的经典动物模型,脑缺血损伤具有高发病率、高死亡率、高致残率的特点,小鼠的脑血管解剖特点与人类较为相似所以小鼠广泛应用于脑缺血损伤的研究当中,脑缺血除了会影响缺血的区域之外还会影响相关的神经甚至整个中枢神经系统,因此小鼠脑缺血损伤模型有助于研究神经连接和大脑整体的改变。
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产品描述

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1 实验动物

SPF级ICR小鼠,健康雄性,6周龄,25克左右

2 实验周期

2-3个工作日

3 建模方法

  1. 实验材料

眼科剪1个、眼科镊1个、弯镊1个、直镊1个、组织镊1个、持针器1个、动脉夹2个、大鼠板、碘伏棉球、酒精棉球、无菌棉签、无菌纱布、剃毛器。

手术器械

  1. 麻醉方法:1 %三溴乙醇,0.3 ml腹腔注射麻醉小鼠,剃毛碘伏消毒;

                                                                                         

                            剃毛                                                                     碘伏消毒                

  1. 实验方法:

①延颈部正中间竖向剪开皮肤创口约3 cm,钝性分离肌肉层,可见底部肌肉下方有轻微搏动即为颈总动脉,分离出颈总动脉后眼科镊小心分离伴行于颈总动脉的迷走神经,分离出颈总动脉大约1~1.5 cm左右尽量向近心端结扎颈总动脉。

                      

                             剪开皮肤                                          钝性分离肌肉层                                                 颈总动脉                                     近心端结扎颈总动脉            

 

    ②可见颈外动脉、颈内动脉与颈总动脉呈“Y字形”分布,分离出独立的两根动脉(颈外、颈内),结扎颈外动脉,颈外和颈总动脉结扎线之间备线打松结。

                                   

                                           颈内颈外与颈总动脉呈“Y”字型                              结扎颈外动脉                                             颈总动脉打活结

③动脉夹暂时夹闭颈内动脉,在备线与颈总动脉结扎处之间离Y字形分叉处约0.8 mm处用眼科剪剪一“V字形”切口。

                                                       

                                                                   微动脉夹夹紧颈内动脉                                                 颈总动脉剪小口

④血管在自然状态下,用眼科镊夹持线栓缓慢进入颈总动脉,到达动脉夹时将预留的松结线稍微拉紧(防止远心端回流渗血),松开颈内动脉夹,当栓线到达Y字形分叉口附近时向颈内动脉继续插入栓线,此时栓线已进入大脑中动脉且不能继续前行。

插入线栓

⑤栓线插入完毕后将预留的结扎线拉紧固定,棉签清理颈部血块,逐层缝合皮肤碘伏棉球消毒,将大鼠放回笼子。1.5 h后,麻醉大鼠,颈部消毒,打开一个小口,用眼科镊夹住栓线固定处将栓线拔出至其头端,剪去多余栓线,逐层缝合。

缝合皮肤

 

 

4 注意事项

(1)分离颈部肌肉时,两侧小块肌肉叫鼓泡腺体,避免损伤导致出血。

(2)见到颈总动脉了要小心分离迷走神经,迷走神经会影响其呼吸而死亡的。

(3)栓线不能反复进退,否则及容易造成蛛网膜下腔出血,而且很容易误解为模型成功。

(4)鼠大脑中动脉永久性闭塞性脑缺血模型,梗死体积出现的最小时间点可能为 2 h,体积随时间进行性增大至12 h基本趋于稳定。

5 模型评价

5..1 神经行为学检查

LONGA评分法,神经学检查分为5个等级。

0分:正常无神经功能缺损。

1分:左侧前爪不能完全伸展,轻度神经功能缺损。

2分:行走时鼠向瘫痪侧转圈,中度神经功能缺损。

3分:行走时鼠身体向瘫痪侧倾倒,重度神经功能缺损。

4分:不能自发行走,有意识丧失。

BERDERSON评分法,姿势反射测验,提尾悬空试验 鼠提尾悬空一米观察前肢屈曲情况,正常鼠向地面伸展双上肢。分为四个等级,分值越高,说明动物行为障碍越严重。

正常: 0级,无明显症状。

轻度: 1级,前肢屈曲。

严重:2级,侧推抵抗力下降,伴前肢屈曲。

重度:3级,侧推抵抗力下降,伴前肢屈曲,有自发性旋转。

5.2 形态学观察

TTC染色步骤:

将脑立即置于-20 °C冰箱冷冻10 min, 用锋利双面剃须刀片按约2 mm厚度,在距额、枕极2 mm间做连续冠状切片,共取5-6个脑片,滤纸覆盖脑表面将脑片放置到含0.5 % TTC的培养皿内,37 °C恒温培养箱避光染色 20 min,注意不时翻动脑片,以使染色均匀,正常组织中的脱氢酶反应,产生深红色使正常组织呈玫瑰红色,缺血組织内线粒体损伤、脱氢酶活性下降,不能诱导染色反应而呈苍白色。

6模型应用

大脑中动脉阻塞(MCAO)模型适用于局灶性脑缺血及相关药物的研究。

7补充说明

本实验是以ICR小鼠为基础制备的模型,若需要其他动物模型需要跟我司联系确定详细报价。

关键词:
动脉
分离
模型
脑缺血
结扎
颈内
1个
眼科
小鼠
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